Caracterizacion de algunos productos naturales con actividad antimicrobiana contra Paenibacillus larvae, agente causal de Loque Americana

Abstract

La Loque Americana es una enfermedad bacteriana que afecta el estado larvalde la abeja doméstica (Apis melifera). Es causada por Paenibacillus larvae, baciloGram positivo cuya principal característica es la de formar esporas muy resistentes. Elcontrol de la enfermedad se realiza con tratamiento quimioterápico con el empleo deantibióticos. Sin embargo, el uso indiscriminado de éstos induce la aparición de cepasbacterianas resistentes; además, pueden dejar residuos en la miel y en otrosproductos de la colmena. Es por ello que esta problemática señala la necesidad dedisponer de una metodología adecuada para controlar el estado sanitario de lascolmenas mediante procedimientos ecológicamente limpios. El uso de extractos devegetales se presenta como un tratamiento alternativo interesante y no contaminantepara combatir la enfermedad. Estudios previos realizados en nuestro laboratoriodemostraron que extractos de diferentes especies vegetales, poseen actividadantibacteriana frente a P. larvae. Entre éstos, Achyrocline satureioides y Minthostachysverticillata, dos especies nativas muy usadas en medicina naturista y popular, fueronlas más efectivas Por ello, y dado que no existen investigaciones realizadas sobre el uso deestas especies en el tratamiento contra Loque Americana, se propone determinar loscompuestos con actividad antimicrobiana sobre P larvae en diferentes extractos y elaceite esencial de A. satureioides y de M verticillata Se emplearon cepas de P. larvae aisladas de colmenas del Dpto. Río Cuarto ycepas provistas por INTA Balcarce. A. satureioides y M. verticillata fueron recolectadasen las sierras de Córdoba de las cuales se obtuvieron: aceite esencial (AE) mediantedestilación por arrastre con vapor de agua utilizando un hidrodstilador con trampa tipoClevenger, y extractos de hexano (EH), benceno (EB), éter etílico (EE) y acetato deetilo (EAE) mediante una extracción líquido-líquido en forma sucesiva. La bioactividadse evaluó por las técnicas de microdilución en caldo y difusión en pozo, siendo los EHde ambas especies, quienes presentaron mayor actividad antibacteriana. Laseparación mediante cromatografía en capa delgada (CCD) de los componentes delos AE y de los EH, mostró la presencia de 11 bandas con diferentes Rf para el AE y 9bandas con diferentes Rf para el EH de A. satureioides, mientras que para M verticillata, la CCD mostró la presencia de 5 bandas con diferentes Rf para el AE y 14bandas con diferentes Rf para el EH. De estas bandas, 10 del AE y 4 del EH de A satureioides evidenciaron actividad antibacteriana cuando se las estudió mediante latécnica de bioautografía. Para M. verticillata, 4 bandas del AE y 1 banda del EHevidenciaron actividad antibacteriana cuando se las estudió mediante la mismatécnica. Finalmente, la identificación de los componentes se realizó mediantecromatografía gaseosa y cromatografía líquida de alta eficacia, determinando que 1,8-cineol, a-copaeno, p-cariofileno, calacoreno, óxido de 13-cariofileno, cubenol y cadinolson los compenentes responsables de la actividad antibacterina del AE de A satureioides, mientras que los compenentes activos del AE de M. verticillata son 1,8-cineol, ocimeno, mentona, isomentona, mentol, a-terpineol, pulegona, carvona, mentilacetato y trans-isolimoneno Estos resultados constituyen la primer evidencia del uso de A satureioides y M verticillata como agentes antibacterianos frente a P larvae e indican la elevadasensibilidad que presenta dicha bacteria frente a productos naturales Es así como sepropone el uso de extractos vegetales como tratamiento alternativo y natural paracontrolar el estado sanitario de las colmenas, incrementando la producción y la calidadde sus productos.