Diversidad de especies de Aspergillus seccion Nigri aisladas de diferentes productos de interes agricola

Abstract

Es bien conocido que la correcta identificación de las especies de Aspergillus es un requisito previo esencial para evaluar el potencial deterioro y contaminación por micotoxinas en alimentos destinado tanto a la alimentación humana como animal. La taxonomía es una disciplina dinámica y los cambios en la nomenclatura de las especies fúngicas, a menudo son difíciles de entender en el campo aplicado. La inadecuada taxonomía y/o incierta nomenclatura en el género Aspergillus, especialmente en la sección Nigri, puede conducir a resultados erróneos, los que pueden deberse a: 1- cambios recientes en la nomenclatura, 2-nuevas tendencias en el estudio taxonómico, incluyendo la descripción de nuevas especies y/o 3- identificación incorrecta. Es por esto que en el presente trabajo se caracterizaron las poblaciones de Aspergillus sección Nigri aisladas de diferentes productos de interés agrícola de Argentina a través de un estudio polifásico, incluyendo datos morfológicos, fisiológicos, ecológicos y moleculares. Los resultados demostraron que el agregado A. niger es el grupo de especies más frecuentemente aislado como contaminante en todos los sustratos analizados, siendo el único presente en soja. En pasas de uvas, el grupo taxonómico siguiente, en orden de importancia, fue la Serie Carbonaria y Aspergillus Uniseriados, y en maní Aspergillus Uniseriados. En cuanto a la producción de micotoxinas, el 96% de las cepas identificadas morfológicamente como A. carbonarius fueron capaces de producir Ocratoxina A (OTA), en cambio sólo el 0,63% de las pertenecientes al agregado A. niger produjeron dicha micotoxina Por lo tanto, se infiere que A. carbonarius sería la principal especie responsable de la posible acumulación de OTA en los sustratos analizados. Además, la producción de Fumonisina B2 por algunas cepas pertenecientes al agregado A. niger, alerta acerca de la posible presencia de esta micotoxina en los sustratos analizados. También se desarrolló un marcador ISSR, el cual permitió evaluar la diversidad de especies de Aspergillus sección Nigri, cuyo análisis concordó con la identidad de los aislados basada en morfología clásica y uso de cebadores específicos A pesar de que este marcador no permitió la categorización taxonómica de todas las especies en cuestión, resultó ser una herramienta de sumo valor cuando se debe identificar un gran número de aislados. El perfil de bandas generadas por el marcador ISSR reveló: -la presencia de un grupo de cepas identificadas morfológicamente como Aspergillus Uniseriados que mostraron una alta similitud genética con la cepa de referencia A. uvarum !TEM 4834; -la presencia de un grupo de cepas identificadas morfológicamente como pertenecientes al agregado A. niger, que mostraron una alta similitud genética con la cepa de referencia A luchuensis ANRC 703; -la presencia de dos cepas, clasificadas morfológicamente como A carbonarius y no productoras de OTA, que mostraron alta similitud genética con la cepa de referencia A. ibericus ITEM 4776. Posteriormente, la categorizaron taxonómica de dichas cepas fue confirmada por análisis de la secuencia de la calmodulina como A. uvarum, A. luchuensis y A. ibericus, respectivamente. Además, este marcador reveló la presencia de un grupo muy homogéneo conformado por cepas aisladas de maní que no habían amplificado con los cebadores NIG1/NIG2 y TUB1/TUB2. El análisis de secuencias de dicho grupo reveló que las mismas eran A. brasiliensis, siendo esta la primera vez que se confirma la presencia de la especie en Argentina. Además, las especies de A. tubingensis, A. niger/A. welwistchiae, A luchuensis y A. brasiliensis fueron claramente separadas por ISSR en cuatro grupos diferentes con altos valores de soporte. El análisis filogenético sugirió que las 11 cepas categorizadas como A. brasiliensis evolucionaron a partir de un ancestro común hipotético no compartido con la cepa de referencia evaluada. Esto podría deberse a variaciones intraespecíficas o bien podría tratarse de especies filogenéticas cripticas dentro del ciado A. brasiliensis. El marcador SCAR desarrollado, permitió distinguir claramente A. ibericus de la especie estrechamente relacionada A. carbonarius de forma rápida, confiable y de bajo costo. Esta distinción es de suma importancia para evitar una sobreestimación de los riesgos de contaminación y toxicológicos