Inactivacion fotodinamica de Candida Albicans sensibilizada por porfirinas

Abstract

El aumento en la incidencia de las infecciones fúngicas y la aparición de cepas resistentes a las terapias convencionales ha renovado el interés en la inactivación fotodinámica (IFD) de microorganismos. Por tal motivo, en este trabajo se evaluaron derivados de porfirina como posibles agentes fototerapéuticos para la inactivación de Candida albicans. Se estudiaron dos porfirinas tetracatiónicas, 5,10,15,20-tetrakis[4-(34V,N- dimetilaminopropoxpfenil]porfirina (TMPyP4f) y 5,10,15,20-tetrakis[4-(3-N,Ar,N- trimetilaminopropoxi)fenil]porfirina (TAPP4÷), y una neutra, 5,10,15,20-tetralcis[4-(34V,N- dimetilaminopropoxi)fenil]porfirina (TAPP), la cual puede adquirir cargas positivas a pH fisiológico. En solución, estos agentes mostraron propiedades espectroscópicas y fotodinámicas adecuadas para ser utilizados como fotosensibilizadores. La interacción entre las porfirinas y las células fue rápida (<5 mm). Si bien TMPyP44- presentó el valor más alto de unión (1,71 nmo1/106 cél.), fue eliminada en un 59% después de una etapa de lavado. En contraste, TAPP" y TAPP permanecieron interaccionando fuertemente con las células. El tratamiento de suspensiones celulares (1x106 UFC/mL) con 5 p.M de porfirina e irradiadas durante 30 mmn con luz visible produjo una inactivación del 99,999%. Este procedimiento provocó un retardo en la curva de crecimiento de las levaduras en caldo Sabouraud, principalmente inducido por TAPP4+ y TAPP. El tratamiento fotodinámico con estas aminoporfirinas combinado con el antifúngico fluconazol, mostró un mejor desempeño de ambas terapias; ya que se requirieron menores dosis de ambos agentes para alcanzar la erradicación celular. Además, estas porfirinas fueron efectivas para la inactivación de C.albicans sobre una superficie o creciendo como colonias sobre agar Sabouraud. El mecanismo fotodinámico inducido por las porfirinas durante la inactivación fue principalmente de tipo II, mediante la participación del oxígeno molecular singlete (102) como principal especie reactiva. Estudios de microscopia de fluorescencia revelaron una distribución de las porfirinas con localización preferente en ciertas regiones subcelulares Estudios a nivel morfológico mostraron daños en la envoltura celular. De modo que, la alteración de esta estructura sería una causa importante en la inactivación de C. albicans. Por lo tanto, las tres porfirinas estudiadas son efectivas para ser aplicadas como fotosensibilizadores en solución o sobre medio sólido. La presencia de cargas positivas aisladas del macrociclo tetrapirrólico permite una unión celular más estable y una notable actividad fotoinactivante para la erradicación de levaduras.