Marcadores morfologicos, fisiologicos y geneticos para la caracterizacion de Aspergillus fumigatus aislados de alimentos para animales : gliotoxina

Abstract

La contaminación fúngica de los alimentos para animales es uno de los problemas más frecuentes durante su elaboración, transporte y almacenamiento, y puede afectar la salud animal con graves pérdidas económicas. En los climas cálidos, los alimentos pueden contaminarse con especies del género Aspergillus, entre ellas A. fumigatus, una especie distribuida mundialmente, saprófita aunque puede ser patógeno oportunista del hombre y de los animales. En éstos, causa procesos respiratorios tales como rinitis alérgica en equinos y aspergillosis en pollos y pavos así como también mastitis clínica o subclínica en vacas, cabras y ovejas. La gliotoxina es la toxina más potente producida por esta especie; debido a sus efectos inmunosupresores, genotóxicos, citotóxicos y apoptóticos se cree que actúa como un factor de virulencia. En función de estos antecedentes, se evaluó la incidencia de las especies de la sección Fumigati en alimentos destinados a animales, la capacidad de producir gliotoxina, la ecofisiología de A. fumigatus sensu stricto y la variabilidad genotípica y fenotípica de cepas seleccionadas de Aspergillus sección Fumigati. Todas las muestras analizadas mostraron contaminación con al menos dos de los principales géneros toxicogénicos y de todas ellas, excepto de los alimentos terminados para cerdos, se aislaron cepas de dicha sección. El 61% de las cepas analizadas fue capaz de producir gliotoxina en amplios rangos de concentraciones, siendo las cepas aisladas de alimentos para perros y las de ensilaje de maíz las que produjeron la toxina en los rangos más amplios y las concentraciones más elevadas. El estudio de la ecofisiología de las cepas A. fumigatus Af16 y A. fumigatus RC2108, confirmadas como A fumigatus sensu stricto mediante el secuenciamiento del gen benA, demostró que los parámetros que tuvieron mayor influencia en la fase de latencia y la velocidad de crecimiento a tensión normal de oxígeno fueron la temperatura y la actividad de agua (aw); mientras que a tensión reducida de oxígeno y a 37 °C, el parámetro más influyente fue la aw. La producción de gliotoxina fue diferente a lo encontrado al analizar el crecimiento de las cepas. El efecto de la interacción de todos los factores fue variable y la concentración más elevada se obtuvo bajo incubación a tensión normal de oxígeno por una cepa aislada de ensilaje de maíz. Se caracterizaron las cepas de Aspergillus sección Fumigati mediante la aplicación de marcadores moleculares neutros. Los RFLPs permitieron un rápido "screening" del conjunto de las cepas analizadas y demostraron que todas presentaron perfiles correspondientes a la especie A. fumigatus sensu stricto. Los marcadores RAPD evidenciaron variabilidad genética intra-específica y demostraron un 78% de similitud genética sugiriendo que las cepas estudiadas constituyen un grupo genéticamente homogéneo. Estos resultados fueron confirmados por secuenciamiento del gen de la 6-tubulina y por análisis preliminar de máxima parsimonia. Los estudios estadísticos multivaríados evidenciaron variabilidad fenotípica entre las cepas estudiadas, no obstante, no hubo asociación entre éstas y su origen de aislamiento. El presente trabajo aporta datos relevantes sobre la caracterización genética y fisiológica de especies epidemiológicamente importantes como A. fumigatus y especies relacionadas que colonizan los alimentos para animales en Argentina.