Estudio de factores de virulencia de cepas de Streptococcus uberis aisladas de Mastitis bovina

Abstract

Streptococcus uberis es reconocido a nivel mundial como el patógeno ambiental más importante asociado a mastitis clínica y subclínica en vacas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar aspectos fenotípicos y genotípicos de cepas de S. uberis y elucidar la patogénesis temprana ocasionada por esta especie bacteriana. Se aislaron 178 cepas de estreptococos a partir de leche de vacas con mastitis clínica (MC) y subclínica (MS) provenientes de 18 tambos pertenecientes a las provincias de Córdoba, Santa Fe y Buenos Aires Cincuenta y cuatro cepas, 17 aisladas de MC y 37 de MS, fueron identificadas como S. uberis mediante pruebas bacteriológicas. Se identificaron 21 perfiles bioquímicos, mostrando la marcada variabilidad fisiológica presentada por las cepas de esta especie. El 76,5% de las cepas de MC y el 81,1% de las cepas de MS fueron confirmadas como S. uberis mediante la técnica molecular de polimorfismos de los fragmentos de restricción Del estudio in vitro de los factores de virulencia en las 43 cepas de S uberis se determinó la producción de cápsula (C) en el 60% de las cepas de ambos orígenes. El factor activador de plasminógeno (FAP) fue detectado en el 84,7% de las cepas de MC y en el 63% de las cepas de MS. Se detectó la producción de factor uberis (FU) en el 23 % de las cepas de ambos orígenes La producción de hialuronidasa se encontró en el 62 % de las cepas de MC y MS. El 97,7% de las cepas presentaron a-hemólisis. Se identificó producción de proteasa en el 69,2% y 93,3% de las cepas de MC y MS, respectivamente Entre las 43 cepas de S. uberis se reconocieron 19 perfiles de virulencia. Se identificaron 14 perfiles genéticos en 32 cepas de S. uberis analizadas mediante electroforesis de campos pulsantes. En general, no se encontró relación entre perfiles genotípicos, perfiles de virulencia, origen y tambo de procedencia Además, se investigó la presencia de los genes asociados a la expresión de C (hasAB y hasC), FAP (pauA/ pauB) y FU (cfu) mediante reacción en cadena de la polimerasa como así también la capacidad de internalización a células epiteliales mamarias bovinas (MAC-T) en 8 cepas Se estudió la patogénesis temprana y respuesta inflamatoria mediante la inducción de mastitis experimental en 6 cabras por inoculación vía intramamaria de 1,7x108 UFC/ml de la cepa S. uberis IR47 aislada de MC. La cepa está caracterizada por la expresión fenotípica de P y H, por poseer los genes de virulencia hasAB/C y pauA, y por presentar capacidad de internalización a las células MAC-T Durante el ensayo se detectó un incremento en el Recuento celular somático a las 8 hs., con un valor máximo de 4,27 x 106 cél/ml a las 20 hs. Se identificó una reducción importante de bacterias en leche de 107 a 104 UFC/ml entre las 4 y 24 hs. pi. S. uberis fue hallado en el tejido de la glándula inoculada (GI) a las 8 hs. pi, con marcada reducción a las 24 hs. A las 16 hs pi se detectaron las lesiones histológicas más severas en el tejido de la Gl. La cepa S. uberis IR47 fue detectada a las 12 hs pi en el lumen de los acinos secretorios e internalizada en las células epiteliales. La infección estuvo focalizada en la glándula mamaria y cedió gradualmente hacia las 24 hs. La cepa S. uberis IR 47 fue capaz de establecer una mastitis subclínica en cabras.