Los biofilm microbianos como factores de virulencia en infecciones intramamarias por Staphylococcus coagulasa negativos : estudio de nuevas estrategias de inmuno-intervencion

Abstract

Staphylococcus coagulasa negativos (SCN) son los microorganismos más frecuentemente aislados de infecciones intramamarias en bovinos, tanto en Argentina como en numerosas partes del mundo. Su patogenicidad está asociada con la presencia de distintos factores de virulencia, entre ellos, la formación de biopelícula (biofilm), que les confiere la capacidad de adhesión a superficies vivas o inertes y protección frente al sistema inmune como ante los agentes antimicrobianos. El objetivo de este trabajo fue obtener un inmunógeno basado en componentes de la matriz del biofilm de una cepa SCN aislada de mastitis bovina, asociado a quitosano (Q) o a Hidróxido de Aluminio como adyuvantes. Para ello se identificaron por PCR-RFLP del gen gap 133 aislados de SCN obtenidos a partir de muestras de leche bovinas de tambos de la cuenca lechera de Villa María, una de las zonas productivas más importante a nivel nacional. Entre las especies más prevalentes, S. xylosus resultó ser la especie con mayor capacidad de formación de biofilm (CFB). La presencia de algún gen o combinación de genes relacionados a formación de biofilm y adherencia celular no mostró relación con la capacidad de formar biofilm lo que indicaría que este tipo de crecimiento es un proceso multifactorial que depende de numerosas variables. Las bacterias que presentaron una menor CFB mostraron una capacidad de internalización celular significativamente mayor, sugiriendo que aquellas cepas que tiene la capacidad de invadir no necesitan la formación de biofilm para sobrevivir en el huésped. Durante la infección experimental de MAC-T con SCN, las células epiteliales mamarias presentaron la capacidad de inducir una respuesta inmune innata mediante la secreción de citoquinas pro- inflamatorias IL-6 e IL1β. La inmunización de 40 vaquillonas Holstein preñadas en el último trimestre de gestación con el precipitado concentrado de la matriz de biofilm combinado con adyuvantes, de una cepa de S. xylosus que indujo una exacerbada respuesta inmune in vitro, estimuló la formación de anticuerpos séricos contra los componentes del biofilm. Los niveles de anticuerpos obtenidos cuando los animales fueron inoculados con el adyuvante Q fueron mayores a aquellos cuando el adyuvante fue Hidróxido de Aluminio. Los resultados obtenidos permiten concluir que se obtuvo un inmunógeno prototípico con una probada actividad, tanto in vitro como in vivo, para generar una respuesta inmune a partir de la matriz de biofilm, por ende, se postula a este como un potencial candidato para el desarrollo de estrategias vacunales futuras.