Desarrollo y evaluacion de diferentes formulaciones farmaceuticas con especies de Lactobacillus probioticas en ovulos para la aplicacion vaginal

Abstract

El rol de mantener el tracto genitourinario femenino sano es llevado a cabo principalmente porespecies del género Lactobacillus. A lo largo del mundo y durante muchos años se hapropuesto la presencia de estos microorganismos como marcador de una microbiota vaginalsaludable. Existe una creciente aparición de infecciones urogenitales recurrentes o recidivas deinfección debidas a microorganismos patógenos resistentes, situación que implica la necesidaddel desarrollo de adyuvantes terapéuticos complementarios a la terapia convencional conantimicrobianos. El género Lactobacillus es de interés en la industria biotecnológica mundialya que algunas especies poseen propiedades antimicrobianas sobre una gran diversidad demicroorganismos patógenos causantes de infecciones vaginales. Las cepas L. fermentum L23 yL. rhamnosus L60 han sido ampliamente estudiadas por el equipo de trabajo del laboratorio deBacteriología y se ha demostrado que poseen un gran potencial biotecnológico como agentesreconstituyentes de la microbiota vaginal y como antagonistas de microorganismos patógenos El objetivo de este estudio fue desarrollar diferentes formulaciones farmacéuticas conteniendolas cepas de lactobacilos probióticas y ensayar sus propiedades biológicas posformulado Luego de la liofilización, el porcentaje de supervivencia promedio de las cepas L23 y L60 fuedel 89% y 95%, respectivamente, demostrando que los lactobacilos fueron altamenteresistentes a este proceso. Una vez incorporados en los óvulos conteniendo distintacomposición química, los lactobacilos evidenciaron distinto perfil de sobrevida según laformulación farmacéutica analizada. La formulación F9? resultó la más adecuada para elmantenimiento de la viabilidad bacteriana de las cepas, cuya composición era de L23 y L60liofilizados con leche al 10% y lactosa al 10%, como componentes base glicerina 16% ygelatina 11,8%, y leche 1,5%, lactosa 2,5% y ácido ascórbico 2% como excipientes. Conrespecto a las propiedades benéficas de superficie relacionadas a la adhesión celular, las cepascontenidas en los óvulos fueron medianamente productoras de biofilm, presentaron valores deautoagregación de hasta 65% y 60% para L23 y L60, respectivamente, y mantuvieron una altahidrofobicidad de superficie a todo lo largo del estudio, en todas las formulaciones ensayadas Las propiedades antagonistas de los microorganismos patógenos estudiadas fueroncoagregación, actividad antimicrobiana e inhibición de la formación de biofilm. L23 presentóvalores de coagregación de hasta 36% y 38% con Escherichia coli y Staphylococcus aureus,respectivamente. La cepa L60 coagregó hasta un 35% y 36% con E. coli y S. aureus,respectivamente. Los halos de inhibición del crecimiento bacteriano alcanzaron valores de másde 30 mm utilizando las dos técnicas de detección, estrías cruzadas y difusión en pozos. Elefecto antimicrobiano de L23 y L60 se debió en un 82% y un 81%, respectivamente, a laactividad de las bacteriocinas. Los metabolitos bioactivos liberados en los sobrenadantes decultivo de los lactobacilos fueron capaces de inhibir totalmente la formación de biofilmproducido por las cepas patógenas indicadoras, ya que en todos los casos los porcentajes deinhibición se encontraron en un rango comprendido entre el 94% y el 100%. Los ensayos confluido vaginal simulado demostraron que la formulación F9 fue aquella que permitió la mayorabsorción de agua y la liberación total de los lactobacilos en el menor tiempo. Finalmente, enlos estudios in situ utilizando células epiteliales vaginales se demostró que ambos lactobacilosrecuperados de la formulación F9? fueron capaces de excluir, competir y desplazar en un 62%,70% y 56% a S. aureus y en un 81%, 70% y 54% a Streptococcus agalactiae, respectivamente En conclusión, los lactobacilos contenidos en los óvulos vaginales fueron capaces demantenerse viables por un extenso periodo de tiempo con todas sus propiedades biológicasintactas posformulado. Este trabajo de Tesis permitió la producción de una formulaciónfarmacéutica con fuerte potencial biotecnológico para ser utilizada en la prevención y/otratamiento de infecciones vaginales.