Determinacion de CIM y CBM de las sustancias tipo bacteriocinas de Lactobacillus fermentum L23 y Lactobacillus rhamnosus L60 sobre Escherichia coliO157:H7 y NO O157:H7

Abstract

Las cepas de Escherichia coli enterohemorrágica (ECEH) componen un subgrupo debacterias patógenas capaces de causar síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. ElSUH es un desorden multisistémico que afecta especialmente a niños y es la principal causade insuficiencia renal aguda en esta población. La mayoría de los pacientes afectados poresta patología logran recuperarse con terapia de apoyo, aunque entre un 2 y 5% de lospacientes mueren y entre un 12 y 30% sufren secuelas graves. E. coli O157:H7 es elserotipo más frecuentemente aislado en casos de SUH, sin embargo son varios losserotipos capaces de causar la enfermedad. La aplicación de microorganismos probióticos,específicamente miembros del género Lactobacillus, o de las sustancias antimicrobianasproducidas por estos microorganismos, se presenta como una valiosa herramienta para elbiocontrol de ECEH. El objetivo de este trabajo fue determinar la mínima concentración delas sustancias tipo bacteriocinas de Lactobacillus fermentum L23 y L. rhamnosus L60necesaria para inhibir y eliminar a E. coli O157:H7 y no O157:H7, así como valorar el tipo deinteracción entre dichas sustancias antimicrobianas. Se evaluó y cuantificó la actividadantimicrobiana de los sobrenadantes libres de células puros (SLC) y los sobrenadantesneutralizados (SLCN) conteniendo las bacteriocinas de ambos lactobacilos mediante latécnica de difusión en pozos. Luego, para evaluar las interacciones entre ambas sustanciasse llevó a cabo la técnica de checkerboard. Como paso preliminar, se evaluó la CIM deambas bacteriocinas sobre una cepa de E. coli mediante la técnica de microdilución en caldoy se determinó además su modo de acción. Mediante la técnica de difusión en pozos seobservó que los sobrenadantes mantenían la mayor parte de la actividad antimicrobianaluego de ser neutralizados, la cual se atribuyó a las bacteriocinas contenidas en ellos Incluso a bajas concentraciones ambas sustancias fueron capaces de inhibir el crecimientode ECEH, observándose que la CIM de la bacteriocina L23 se encontró en un rangocomprendido entre 40 y 80 UA ml-1, mientras que la CIM de L60 presentó valores de entre40 y 160 UA ml-1 para todas las cepas ensayadas. Posteriormente, mediante la técnica demicrodilución en caldo se determinó que ambas bacteriocinas presentaban una CIM de160 UA ml-1 sobre ECEH y un modo de acción bacteriostático. Finalmente, utilizando latécnica de checkerboard, se observó que estas sustancias antimicrobianas presentaban unainteracción sinérgica sobre ECEH. En conclusión, ambas bacteriocinas podrían representaruna estrategia alternativa promisoria para el biocontrol de este microorganismo patógeno