Diseño de formulacion probiotica de aplicacion intramamaria para la prevencion de mastitis bovina

Abstract

La mastitis bovina es la enfermedad infecciosa que genera mayores pérdidas en la industria lechera. Se define como la inflamación de la glándula mamaria, principalmente como consecuencia de infecciones de microorganismos. Actualmente, la aplicación intramamaria de antibióticos es la medida más efectiva para prevenir nuevas infecciones. Esta práctica ha facilitado la aparición de bacterias resistentes a antibióticos, por lo que se recomienda restringir su uso solo al tratamiento de casos clínicos. Los microorganismos presentes naturalmente en la ubre, como las bacterias del ácido láctico, poseen propiedades probióticas y tienen la capacidad de inhibir bacterias patógenas. Para su aplicación es de vital importancia la conservación de las bacterias con propiedades probióticas, teniendo en cuenta que puedan ser almacenadas y disponer de ellos en forma viable en el momento de su administración. La técnica mayormente utilizada en la preservación de bacterias es la liofilización. Si bien es considerada idónea, los parámetros que permiten un resultado aceptable son variables de una cepa a otra. El objetivo principal de este trabajo fue diseñar una formulación probiótica de aplicación intramamaria para la prevención de la mastitis bovina utilizando dos cepas de bacterias lácticas, Lactobacillus perolens CRL 1724 y Lactococcus lactis subsp. lactis CRL1655 aisladas y caracterizadas en estudios previos, en los que presentaron potencialidad para ser utilizadas como una alternativa natural para la prevención de esta enfermedad. Para determinar las condiciones óptimas de liofilización y almacenamiento se estudiaron diferentes medios crioprotectores formulados sobre la base de leche descremada y azucares. De esta etapa se seleccionó un único medio y se probó el efecto del agregado de inulina, un compuesto prebiótico con potencial crioprotector, y ácido ascórbico como antioxidante. Los ensayos mostraron que la leche descremada incrementa la tasa de supervivencia en ambas cepas. Además, la adición de hidratos de carbono mejora la resistencia al estrés causado por la liofilización. Seleccionando como base el medio protector compuesto por leche descremada y lactosa se comprobó que la adición de ácido ascórbico afecta negativamente al producto, mientras que el agregado de inulina no afecta de manera la estabilidad de la formulación probiótica. De este modo, se garantizó la estabilidad por el lapso de 6 meses sin pérdida de viabilidad considerable. Las cepas deshidratadas en leche descremada combinada con lactosa e inulina demostraron poseer un buen potencial para su uso en una formulación probiótica. Además, se realizó la caracterización genética de las bacterias lácticas mediante electroforesis de campos pulsantes, lo que permitió diferenciar las cepas claramente. Por último, se estudió el vehículo para administrar la formulación, como así también el efecto de la inoculación en glándula mamaria de bovinos al secado. Si bien el alginato de sodio adicionado a la formulación mostró ser un espesante adecuado e inocuo para las bacterias probióticas, la administración del mismo en la glándula mamaria produjo inflamación. Los resultados obtenidos en el presente trabajo sustentan el concepto de que cada cepa debe ser estudiada individualmente en cada condición y demuestran que la liofilización es una técnica adecuada para la conservación de las bacterias probióticas. Conjuntamente, sienta las bases para estudios futuros de inecuación con una formulación probiótica que permita analizar el carácter preventivo del producto y evaluar su efectividad en comparación con el uso de antimicrobianos.