Actividad antimicrobiana de fracciones activas de extractos de mintostachys verticillata (peperina) frente a Paenibacillus larvae

Abstract

Paenibacillus larvae es una bacteria Gram (+), esporulada, agente causal de Loque Americana. Esta es una enfermedad de la larva de la abeja Apis me/Jifera, es muy nociva y altamente contagiosa, causante de grandes pérdidas económicas a los apicultores alrededor del mundo. Diferentes antibióticos han sido utilizados para controlar la Loque Americana, pero su uso tiene importantes desventajas, como la aparición de cepas resistentes, y la presencia de residuos en los productos de la colmena. Por ello es necesario desarrollar nuevas estrategias para el tratamiento de colonias infectadas Se sabe que algunos aceites esenciales y extractos derivados de plantas pueden inhibir el crecimiento de P. larvae. Estudios previos en nuestro laboratorio muestran que extractos de distintas especies vegetales tienen actividad antibacteriana frente a P. larvae Una de las plantas que mostró mayor actividad es Minthostachys verticillata ("peperina"), una especie nativa ampliamente usada en la medicina popular El objetivo de esta investigación es desarrollar tratamientos alternativos y no contaminantes para el control de Loque Americana, a partir de extractos de M. verticillata Para ello utilizamos cepas de P. larvae aisladas de apiarios del Departamento Río Cuarto, en la provincia de Córdoba y otras aportadas por INTA Balcarce. M. verticillata fue recolectada en el Cerro Pan de Azucar (31°14'17,72" S 64°25'12,29" O), ubicado en la ciudad de Cosquín, en la provincia de Córdoba. A partir de las plantas secas se obtuvieron extracto hexano (EH), extracto benceno (EB) y extracto éter etílico (EE), por medio de una extracción líquido-líquido. La actividad antibacteriana de estos se analizó con la técnica de microdilución en caldo. El EH fue el más bioactivo con valores de concentrción inhibitoria mínima (CIM) entre 0,032 y 0,125 mg/ml, y de concentracín bactericida mínima (CBM) entre 0,125 y 0,5 mg/ml Por medio de TLC se separaron los componentes del EH, se pudieron observar seis bandas reveladas bajo luz UV y cinco bandas reveladas con yodo. De estas últimas las bandas con Rf 0,83 y Rf 0,58 mostraron actividad antibacteriana frente a P. larvae en la prueba de bioautografía. Con el fin de analizarlas individualmente, las bandas 0,83 y 0,58, se separaron con cromatografía en columna tipo flash. Ambas bandas mostraron actividad antibacteriana contra P. larvae, pero esta fue mucho menor que la del EH. La banda 0,83 tuvo valores de CIM entre 4 y 8 veces mayores que el EH, y la banda 0,58 tuvo valores de CIM 32 veces mayores que el extracto completo. Esto sugiere la existencia de un efecto sinérgico entre los componentes del extracto Dado el potencial del EH como posible antibacteriano para el tratamiento de Loque Americana se decidió evaluar la toxicidad oral aguda de éste en las abejas adultas, y presentó una LD50> 200 }Ad/abeja a las 24 Hs, lo que indica que el extracto no es tóxico para las abejas Estos resultados muestran que el EH podría utilizarse como antibacteriano contra P. larvae, con la ventaja de que la bacteria no presenta resistencia a éste y que no dejaría residuos peligroso en los productos de la colmena, preservando su inocuidad y calidad Por ello se debe seguir estudiando este extracto, para determinar en mayor detalle su composición y analizar distintas dosis y formas de administración que hagan eficiente su uso a campo