Estudios bioquimicos y geneticos de bacterias nativas solubilizadoras de fosfato del area manisera de la provincia de Cordoba

Abstract

En el presente trabajo de tesis se realizaron estudios bioquímicos y genéticos de bacteriasnativas solubilizadoras de fosfato del área manisera de la provincia de Córdoba. Losmismos se abordaron con el objeto de evaluar los mecanismos involucrados en lasolubilización de fosfato y estudiar el efecto de la aplicación de agroquímicos sobre dichapoblación En este estudio fueron empleadas 18 bacterias solubilizadoras de fosfato aisladas deplantas de maní de la región manisera de la provincia de Córdoba. Estas bacterias fueronseleccionadas a partir de una colección de 433 aislamientos solubilizadores de fosfato porproducir los mayores halos de solubilización de fosfato en medio sólido conteniendofosfato tricálcico como única fuente de fósforo (P). A los fines de identificartaxonómicamente a las bacterias solubilizadoras de fosfato seleccionadas fueron obtenidassus secuencias parciales del gen ARNr 16S. El análisis de dichas secuencias permitiódeterminar que las bacterias pertenecen a los géneros Serratia, Enterobacter, Pantoea,Acinetobacter, Bacillus y Enterococcus. El análisis cuantitativo de la capacidadsolubilizadora de fosfato de las bacterias consistió en determinar los niveles de Psolubilizado en el medio en presencia o ausencia de soluciones tampón y se analizaron lasvariaciones de pH del medio. Asimismo, se determinaron los niveles de ácido glucónicoproducidos por las bacterias, principal ácido asociado al proceso de solubilización defosfato, y la presencia del gen pqqE en el genoma de las mismas. Los niveles de Psolubilizado por las bacterias y la disminución significativa de los valores de pH delsobrenadante del cultivo observados en la mayoría de las bacterias, sugieren que elmecanismo mediante el cual las bacterias de la colección solubilizan fosfato involucraría laacidificación del medio, probablemente como consecuencia de la producción de ácidosorgánicos. Las bacterias produjeron diversas cantidades de ácido glucónico, sin que existacorrelación entre dichos valores y los niveles de P solubilizado por la mayoría de losaislamientos analizados. La presencia del gen pqqE se evaluó con el fin de establecer unaposible relación entre ésta y la capacidad de producir ácido glucónico de las bacterias. Seconfirmó su presencia en todas las bacterias Gram negativas de la colección y en cepas dereferencia con capacidad solubilizadora de fosfato Los efectos benéficos de la inoculación de las bacterias de la colección en plantas de maníse evaluaron en microcosmo, observándose que promovió el crecimiento vegetal eincrementó el contenido de P soluble tanto en el tejido de las plantas como en el soporteutilizado para su crecimiento La evaluación del efecto de la aplicación de agroquímicos en los suelos maniseros de laprovincia de Córdoba sobre la abundancia y diversidad genética de bacteriassolubilizadoras de fosfato indicó que no se afectó la abundancia pero sí la estructura de lacomunidad de bacterias solubilizadoras de fosfato cultivables, determinándose un aumentode la diversidad genética de dicha población y modificación de la frecuencia del genbacteriano pqqE. Además, se determinó una mayor diversidad del gen pqqE en lapoblación solubilizadora de fosfato no cultivable en la parcela tratada con agroquímicosrespecto de la control La presencia del gen pqqE fue confirmada en la mayoría de las bacterias solubilizadoras defosfato Gram negativas aisladas de este ensayo y en todas las bacterias Gram negativas dela colección. Por lo tanto, se sugiere que este gen sería un potencial marcador molecular debacterias solubilizadoras de fosfato Gram negativas.