Obtencion y caracterizacion de mutantes de Streptococcus uberis deficientes en los genes pauA y sua

Abstract

La mastitis bovina continúa siendo la enfermedad más frecuente y costosa para laexplotación lechera pese a que se han realizado considerables progresos en el control dedicha enfermedad. Se estima que el 90% de los casos de mastitis infecciosas encontradasfrecuentemente en tambos son causadas por bacterias de los géneros Staphylococcus yStreptococcus. Los estreptococos ambientales son frecuentemente aislados tanto de mastitisclínicas como subclínicas, considerándose a Streptococcus uberis como el principal patógenoambiental. Si bien la patógenesis de la mastitis producida por S. uberis aún no es biencomprendida, se han descripto potenciales factores de virulencia entre ellos PauA y SUAM,asociados a la activación del factor activador del plasminógeno y a la capacidad de adherenciae internalización a la células epiteliales mamarias bovinas. La ineficacia de las medidas decontrol tradicionales para reducir la tasa de nuevas infecciones ha dirigido la investigaciónhacia la búsqueda de métodos de control alternativos basados en el desarrollo de vacunaspara complementar las medidas de control existentes. La mayoría de los hallazgos informadosdemuestran que tanto las proteínas PauA como SUAM podrían ser empleadas comoantígenos para el posible desarrollo de una subunidad vacunal. El objetivo del presente trabajoestuvo dirigido a la obtención de mutantes de S. uberis deficientes en los genes pauA y suamediante mutagénesis sitio-dirigida y la posterior caracterización de dichas mutantes. Para laobtención de las mutantes se empleó el uso combinado de dos tipos de vectores conreplicación condicional, derivados del plásmido pWV01: los vectores pORI280 y pG+host3 Para ello, fragmentos amplificados de los genes pauA y sua fueron clonados en el plásmidopORI280 y recuperados en la cepa E. coli EC1000 RepA+. Posteriormente los plásmidosrecombinantes se emplearon para transformar la cepa S. uberis seleccionada Finalmente, la metodología empleada en este trabajo permitió obtener cepas mutantesde S. uberis. Dichas cepas fueron caracterizadas preliminarmente a nivel genotípico yfenotípico. Cabe destacar que en la bibliografía nacional e internacional no se han descriptoestrategias para la obtención de mutantes en S. uberis como la que ha sido desarrollada eneste trabajo.