Estudio de las propiedades electroanaliticas y desarrollo de dispositivos nanotecnologicos para la cuantificacion de ocratoxina A-OTA- en uvas y subproductos

Abstract

En este trabajo de tesis doctoral se realizaron estudios por una parte,relacionados a las propiedades electroquímicas de ocratoxina A (OTA) sobreelectrodos de oro desnudo, donde se definió un pre-pico de adsorción. Posteriormente,se estudió el proceso de oxidación de OTA sobre electrodos de oro modificados conmonocapas autoensambladas de diferentes tioles. La mejor respuesta electroquímicase obtuvo cuando el electrodo de oro se modificó con el 2-aminoetanotiol (cisteamina) Se realizaron estudios a distintos pH y se encontró que la respuestavoltamperométrica de la cupla redox superficial, se define mejor a pH 4,0 sobre elelectrodo modificado que sobre el electrodo de oro desnudo. Dicha cupla redoxsuperficial se caracterizó termodinámica y cinéticamente mediante voltamperometríade onda cuadrada y dio lugar al desarrollo de una metodología electroanalítica para ladeterminación de OTA. Ello permitió poner a punto una técnica para cuantificar OTAen matrices reales. Dichas matrices fueron muestras de vino tinto, en las cuales severificó la ausencia de la micotoxina por el método de referencia (HPLC, con detecciónpor fluorescencia). Estas muestras de vino se contaminaron "ex profeso" con lamicotoxina. Se desarrolló un método de extracción de la micotoxina basado en unadoble extracción Li L y se determinaron las cifras de mérito del método, obteniendouna sensibilidad de 8760 A M-1, un límite de detección (LD) de 0,004 ppb y un límite decuantificación (LO) de 0,012 ppb. A fin de evaluar la exactitud del método propuesto serealizaron, por un lado, ensayos de recuperación por el método de las adicionesestándares y, por otro lado, se comparó el método propuesto con el método oficialobteniendo alta concordancia Por último, se llevó a cabo el desarrollo de un inmunosensor electroquímicopara determinar OTA en muestras de vino tinto. El inmunosensor se basó en el uso deesferas magnéticas funcionalizadas con proteína G (MB), las cuales actúan como fasesólida para la reacción de afinidad entre OTA y OTA-HRP con el anticuerpomonoclonal de OTA (AcmOTA) y un sistema de electrodos de láminas impresas (ELI)usado como elemento de transducción electroquímico. El inmunosensor se basó en uninmunoensayo competitivo directo entre OTA presente en las muestras de vino tinto yOTA marcada con la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP) (OTA-HRP). Laperformance obtenida con el inmunosensor electroquímico fue: un intervalo lineal dePatricio René Perrotta Tesis Doctoral en Ciencias Químicas0,01 a 20 ppb, un límite de detección de 0,008 ppb y un IC50 = (0.272 ± 0.081) ppb Además, se obtuvo una muy buena precisión, con un coeficiente de variación (CV) de5,56 % y una muy buena recuperación (92 al 110 %). Este inmunosensor presentaimportantes ventajas respecto a los métodos comunes de determinación, tales como,medición directa sin pre-tratamiento de la muestra, pequeños volúmenes de muestras,tiempos cortos de análisis y un LD que está muy por debajo de lo establecido por laComisión Reguladora de la Unión Europea (2 ppb).