Fosforilcolina fosfatasa de P.aeruginosa : busqueda del sitio de Interaccion de Amonio Cuaternario y de los Residuos Involucrados en la especifidad de sustrato

Abstract

Fosforilcolina fosfatasa (PchP) de P. aeruginosa es una enzima involucradaen la infección que produce esta bacteria a nivel pulmonar y de otros órganoso tejidos. PchP pertenece a la superfamilia Haloácido Dehalogenasa (HAD)y cataliza la hidrólisis de fosforilcolina (Pch) con producción de colina yfosfato inorgánico. Aunque se conocen los residuos aminoacídicos del sitiocatalítico de PchP involucrados en la unión de cationes divalentes y laporción fosfato del sustrato, los residuos implicados en la unión del amoniocuaternario (NR4+) aún son desconocidos. Con el objetivo de localizar ycaracterizar posibles sitios de interacción entre PchP y el grupo NR4+, serealizaron las mutaciones sitio-específicas E42A, E43A y 82YYY84por82AAA84 (3YA). Las enzimas mutadas presentaron importantes cambios enla afinidad por el sustrato y en la inhibición por Pch y otros compuestos deNR4+, lo que permitió sugerir por primera vez la identidad y localización delos residuos aminoacídicos involucrados específicamente en la interacciónentre PchP y el grupo amonio cuaternario. Al mismo tiempo, la construccióny el análisis del un nuevo modelo molecular de PchP posibilitó una mejorcaracterización del sitio de unión de amonio cuaternario y mediante dockingmolecular, fue posible predecir nuevos residuos involucrados en la entrada yunión del sustrato y/o ligandos inhibidores: F80, D90, D91, V93, C94, Y95, W97yA167.