Respuesta inmune especifica en vaquillonas inmunizadas con la cepa mutante avirulenta taphylococcus aureus Rc122 : determinacion de anticuerpos especificos y su capacidad opsonica

Abstract

La mastitis bovina es la enfermedad del ganado lechero que mayores pérdidaseconómicas a nivel mundial causa al productor y a la industria lechera, especialmenteen las regiones con una producción intensiva. Aunque en Argentina no existenestadísticas actualizadas acerca de las pérdidas económicas, se estima que superanlos $220 millones por año, que se deben no solamente a una marcada disminución enla producción, descarte de leche, a gastos de control y tratamiento, sino también a lareducción en el valor biológico y pérdida de potencial genético Staphylococcus aureus es el principal agente causal de la mastitis bovina La vacunación representa una estrategia importante para el control de la mastitis,ya que su objetivo principal es incrementar la concentración de anticuerposopsónicos en sangre y en leche contra un determinado microorganismo, de manerade inhibir su crecimiento y producción de toxinas Estudios realizados en el laboratorio de Genética Microbiana de la UNRCpermitieron la obtención y caracterización de una mutante avirulenta de S. aureus,designada RC122. Esta mutante obtenida por mutagénesis con nitrosoguanidina,mostró un menor tamaño de colonia, una marcada disminución de la virulencia (1350veces menor) en modelo de ratón, crecimiento lento y disminución en la síntesis devarias exotoxinas tales como ? y ? hemolisinas, DNAsa y coagulasa con respecto ala cepa parental RC108 El objetivo general de este trabajo fue evaluar la potencialidad de la mutanteavirulenta Staphylococcus aureus RC122 como cepa viva atenuada en un ensayo deprotección, para ser utilizada como cepa vacunal contra la mastitis bovina Para el ensayo de vacunación se seleccionaron nueve vaquillonas HolandoArgentino, las cuales se asignaron a dos grupos de 5 y 4 animales, constituyendo losgrupos vacunado (GV) y no vacunado (GNV), respectivamente. El esquema devacunación involucró la administración de 4 dosis al GV: las tres primeras en formasubcutánea (SC) 30 días antes de la preñez, 30 días después de la preñez y 10 díasantes del parto, y la cuarta en forma intramamaria (IM) 20 días después del parto Con las dosis SC se pretende aumentar la producción de anticuerpos específicos ensangre en las vaquillonas al momento del parto (período de mayor susceptibilidad ala enfermedad), mientras que el fin de la dosis IM sería la de estimular el pasaje deanticuerpos específicos de la sangre a la leche para favorecer la fagocitosis. El GNVfue tratado de igual manera con un placebo. Este esquema también involucró eldesafío de todos los animales (GV y GNV) con la cepa virulenta parental RC108 40días después del parto (20 días después de la dosis IM), con el fin de evaluar la capacidad protectora de la vacuna frente a la infección con S. aureus. A diferentestiempos se tomaron muestras de sangre y leche. Se llevó a cabo la determinación delrecuento de células somáticas (RCS), la bacteriología de las muestras de lechedespués del desafío y los de casos de mastitis clínicas y subclínicas (Pellegrino,2007). En el presente trabajo se evaluó:? Reactividad de los sueros de vacas vacunadas frente a la cepa avirulenta y adiferentes cepas de S. aureus aisladas de huéspedes humanos y bovinos, como unaforma de estimar si existe reacción cruzada entre los anticuerpos específicos contrala cepa RC122 y cepas heterólogas ? Niveles de anticuerpos específicos (IgG específica, IgG1, IgG2, IgM e IgA) enmuestras de sangre y leche de animales vacunados y no vacunados ? Capacidad opsónica de los sueros obtenidos de vacas inmunizadas medianteensayos de fagocitosis con leucocitos PMN bovinos, con el objeto de estableceralgún grado de relación entre la disminución de bacterias en leche en el grupovacunado y la producción de anticuerpos específicos Los resultados obtenidos mostraron que, durante el ensayo de protecciónrealizado, los animales del GV presentaron mayores niveles de anticuerposopsónicos que aquellos animales no inmunizados. Esto quedó demostrado cuandotodos los animales (GV y GNV) fueron desafiados con la cepa parental virulenta. Lasvacas vacunadas llegaron al parto con un mayor título de anticuerpos en sangregenerados por el estímulo sistémico. Además, antes de la aplicación de la D4, losanimales vacunados presentaron títulos significativamente mayores de anticuerposen leche, con lo cual la administración de esta última dosis de vacuna no tendría unefecto considerable. Por otro lado, cuando las vacas de ambos grupos fuerondesafiadas, se pudo observar que las vacunadas presentaron un menor porcentajede infección. También se observó un índice de fagocitosis (IF) por neutrófilos PMNbovinos significativamente mayor en sueros de sangre y leche del GV, no sólo en losensayos realizados con la cepa vacunal, sino también para la cepa parental y cepasheterólogas de origen bovino y humano Podemos concluir que el esquema de vacunación utilizado, empleando lamutante avirulenta S. aureus RC122 como inmunógeno, genera una respuestainmunológica elevada en sangre y leche de vaquillonas del GV, dada por un aumentode los niveles de anticuerpos opsónicos, lo cual favorece la fagocitosis por parte deneutrófilos PMN bovinos, principal barrera de defensa contra patógenos intramamariosbovinos.